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遺伝子安定発現細胞株の構築

 人工染色体ベクターは既存の発現系にない様々な特徴を有しております。弊社では、これらの特徴を活かした安定的な遺伝子発現細胞株の構築サービスを行っております。創薬プロセスにおける医薬品候補化合物のスクリーニングやin vitro 薬理試験などへご利用いただけます。

人工染色体ベクターを用いて構築した遺伝子安定発現細胞株の特徴構築
既存の発現系での問題点 人工染色体ベクターを使用する利点
遺伝子搭載 ・搭載サイズに制限がある
・制限酵素により遺伝子組込みを行うため、搭載遺伝子の制限酵素サイトやサイズによって制限あり
・搭載サイズに制限がないため、ゲノムDNAを搭載可能 (スプライシングバリアントの評価可能)
・複数の遺伝子を搭載可能 (タンパク質-タンパク質相互作用解析などが可能)
プロモーター ・外来プロモーターによる強制発現の場合、発現量利用をコントロールできない(生理条件とは異なる可能性) ・オリジナルプロモーターによる発現が可能なため 14インチ サマータイヤ セット【適応車種:アルト(HA23系)】HOT STUFF プレシャス アストM1 ブラック/リムポリッシュ 4.5Jx14SINCERA SN832i 165/55R14 フロアマット テラノレグラス ゴムマット 【カスタム フチ色赤 国産 ラバーマット 防水 オーダータイプ カーマット】【RCP】02P09Jul16、生理的条件での発現が可能(生体を反映した発現量や組織特異的発現が可能)
遺伝子安定発現細胞株の構築 ・恒常的に発現させるには、

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、過剰発現やサイレンシングが起こる
・宿主染色体とは独立して存在する
・同じ人工染色体ベクターを様々な種類の細胞株に移入することができる
・発現に宿主染色体から影響を受けない。
ベクター安定性 ・発現消失が起こる場合もある ・長期間一定のコピー数で維持される
遺伝子導入実施例
搭載遺伝子 DNAタイプ 受容細胞 概要 引用文献
CMV-human EPO cDNA HFL-1 エリスロポエチン発現系の構築 Kakeda et al., 2005(17)
CAG-human FVIII cDNA CHO hprt-, hiMSC 1-16コピーのFVIII遺伝子を発現 Kurosaki et al. 2011(11)
HSP70-insulin cDNA HT1080 HSP70プロモーターを利用したインスリンの発現 Suda et al 2006(14)
Human dystrophin ゲノム hiMSC,mouse,mdx-iPS, DMD-iPS ジストロフィン遺伝子を含むHACベクターをIPS細胞へ導入 Hoshiya et al. 2009(20)
Kazuki et al. 2010(18)
Mouse CD40L ゲノム Jurkat,U937 CD40リガンド遺伝子を発現 Yamada et al. 2008(13)
Human P53 ゲノム mGS p53-/- マウスp53欠損細胞にhP53遺伝子を導入 Kazuki et al. 2008(23)
TR-DNA-PKcs cDNA V3 遺伝子修復に関連するDNA-PKcsをTetシステムで発現コントロール Otsuki et al 2005(16)
Ubc-hTERT-IRES-GFP cDNA HFL-1 テロメラーゼ逆転写酵素遺伝子の発現により正常繊維芽細胞の寿命を延長 Shitara et al. 2008(26)
OPN-EGFP cDNA hiMSC OPNプロモーターによる細胞種に特異的な発現系の構築 Ren et al. 2005(25)
OC-GFP cDNA CHO OCプロモーターからのGFP発現による骨形成因子を含む食品等のスクリーニング系 Takahashi et al 2010(27)

Kazuki Y et al., Gene Ther 2011 Table 2より抜粋

■ご依頼の流れ

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